| 更新時(shí)間： | 2024-12-31 |
| 型 號： | |
| 所屬分類： | 酶和輔酶（Sigma原裝） |
| 報(bào) 價(jià)： |  |
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶介紹：通過G6PD獲得NAPDH,通過檢測340nm處NADPH吸光度增高速率,計(jì)算酶的活性。儲存條件：-20℃,避光,6個(gè)月用途：簡易法檢測（6GPD）活性
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)檢測試劑盒(簡易微板法)
產(chǎn)品簡介：
葡糖-6-磷酸脫氫酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase，G-6-PD 或 G6PD)是糖酵解途徑、檸檬酸循環(huán)以外的另一個(gè)葡萄糖分解途徑的磷酸葡萄糖酸途徑(磷酸戊糖途徑)中
的*個(gè)酶(EC1.1.1.49)。
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)檢測試劑盒(簡易比色法)其檢測原理是紅細(xì)胞 G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-內(nèi)酯，后者很快氧化成 6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同時(shí) NAPD 被還原成 NADPH，其反應(yīng)公式如下：
G-6-P+NAPD+ →6-PGA+L-NADPH。
在上述偶聯(lián)反應(yīng)中，NADPH 生成速率與樣本中酶活性呈正比，通過酶標(biāo)儀或自勱分析
儀在 340nm 處檢測吸光度升高速率( A/min)，升高速率( A/min)與 G-6-PD 活性呈正，直接計(jì)算酶的活性單位。100T 該試劑盒試劑可以檢測 50 次樣本，該試劑盒僅用于科研領(lǐng)
域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
試劑(A): 樣本稀釋液 | 30ml | -20℃ 避光 |
試劑(B): G6PD assay buffer | 30ml | 4℃ |
試劑(C): NADP | 9mg | -20℃ |
試劑(D): G-6-P | 1 支 | -20℃ |
試劑(E): G-6-P 稀釋液 | 10ml | RT |
自備材料：
1、生理鹽水
2、水浴鍋
3、96 孔板
4、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備溶血液：取新鮮抗凝血，離心取上清及白細(xì)胞層，用 4℃預(yù)冷的生理鹽水洗滌 2 次，
每次取上清時(shí)，務(wù)必去除剩余的白細(xì)胞層，再加預(yù)冷的生理鹽水配成含紅細(xì)胞壓積為
30%的紅細(xì)胞懸液，4℃保存備用。臨用前，以樣本稀釋液稀釋 25 倍，即為溶血液。4℃
保存 10h，-20℃保存 48h。
2、配制 NADP 儲存液：取 9mg NADP 溶解于 1ml G6PD assay buffer，充分混勻，配制
成 NADP 儲存液(9mg/ml)，-20℃保存備用。
3、配制檢測工作液：取 NADP 儲存液和 G6PD assay buffer，按 NADP 儲存液(9mg/ml)：
G6PD assay buffer=1：49 的比例混合，即為檢測工作液。-20℃保存，一個(gè)月有效。4、配制 G-6-P 工作液：取 G-6-P 1 支溶解于 G-6-P 稀釋液 10ml，混勻，即為 G-6-P 工
作液，分裝成小份后，-20℃保存備用。
5、分光光度計(jì)檢測：按照下表設(shè)置空白管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。
加入物 | 空白管 | 測定管 |
檢測工作液(μl)(37℃預(yù)溫) | 220 | 220 |
G6PD assay buffer (μl) | 5 | － |
溶血液(μl) | － | 5 |
混勻，37℃孵育 10min。 |
| |
G-6-P 工作液(μl) | 25 | 25 |
混勻，37℃孵育 60s，在 340nm 處 1-3min 各管吸光度
變化，計(jì)算各管 A/min。
6、生化分析儀檢測：按照下表設(shè)置主要參數(shù)。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用
量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。 |
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波長 | 340nm |
反應(yīng)溫度 | 37℃ |
孵育時(shí)間 | 90s |
連續(xù)監(jiān)測時(shí)間 | 60s |
比色杯光徑 | 1.0cm |
系數(shù) | 8040 |
待測樣品 | 6μl |
檢測工作液 | 264μl |
G-6-P 工作液 | 33μl |
計(jì)算：
6
分光光度計(jì)計(jì)算公式：G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(250/5)= A/min×8040
式中：6220=NADH 的吸光度250=反應(yīng)液的總體積(μl) 5=待測樣品體積(μl)
生化分析儀計(jì)算公式：G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(303/6)= A/min×8040
6
式中： A/min=測定的 340nm 吸光度的升高速率
6220=NADH 的吸光度303=反應(yīng)液的總體積(μl) 6=待測樣品體積(μl)
參考范圍：
成年健康人紅細(xì)胞 G6PD：8-18U/g Hb
注意事項(xiàng)：
1、 血清中 G6PD 活性在室溫可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 個(gè)月。
2、 嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會(huì)引起測定管吸光度增高。
3、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期：6 個(gè)月有效。
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