業(yè)執(zhí)照.jpg)
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 42mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 576µL 無(wú)水乙醇 (自備) ，24µL 蒸餾水充分溶解。 (變褐色后不能再使用)
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，0.5 µmol/mL 苯酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn) 化及其生物有效性，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有 效磷含量和 pH 顯著影響，根據(jù)最適 pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。
堿性環(huán)境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過(guò)測(cè)定酚的生成量即 可計(jì)算出 S-AKP/ALP 活性。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式 移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
稱取風(fēng)干混勻土壤約 0. 1g ，加入 0.05mL 甲苯 (自備) ，輕搖 15min ；加 0.4 mL 試劑一并且搖 勻后，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱，開(kāi)始計(jì)時(shí)，催化反應(yīng) 24h；到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以 終止酶催化的反應(yīng)。10000rpm 室溫離心 10min ，取上清液置于冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟：
(1) 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm ，蒸餾水調(diào)零。
(2) 空白管：取微量比色皿/酶標(biāo)板，加入 10 µL 試劑一，20 µL 試劑三，4 µL 試劑四，充分混 勻，顯色后再加蒸餾水 166µL ，混勻后室溫靜置 30 min ，于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為 A 空白管。
(3) 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量比色皿/酶標(biāo)板，加入 10 µL 標(biāo)準(zhǔn)液，20 µL 試劑三，4 µL 試劑四，充分混 勻，顯色后再加蒸餾水 166µL ，混勻后室溫靜置 30 min ，于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。
(4) 測(cè)定管：取微量比色皿/酶標(biāo)板，加入 10 µL 上清液，20 µL 試劑三，4 µL 試劑四，充分混 勻，顯色后再加蒸餾水 166µL ，混勻后室溫靜置 30 min ，于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為 A 測(cè)定管。 注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。
S-AKP/ALP 活性計(jì)算：
活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 1 個(gè)酶活單位。
S-AKP/ALP ( nmol/d/g ) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液 ×(A 測(cè)定管－ A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－ A 空白管)]×V 總
÷W÷T×1000
=725×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5 µmol/mL； V 總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣品質(zhì)量，g；T ：催化 反應(yīng)時(shí)間，24 h=1 d；1000：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1µmol=1000nmol。
注：線性范圍為 0.03125µmol/mL-2.5µmol/mL
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