孔雀石綠快速檢測試劑盒說明書-上海研謹生物科技有限公司

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孔雀石綠快速檢測試劑盒說明書

點擊次數(shù)：2083 更新時間：2019-03-22

EF21A\J1 2016-01版

孔雀石綠

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物孔雀石綠將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物孔雀石綠的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物孔雀石綠的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度： 0.05ppb
孵育溫度： 25℃
孵育時間： 30min～30min～15min
樣本檢測限

水樣 ······································· 0.1ppb

水產(chǎn)品 ······································· 0.5ppb

交叉反應率

顯性孔雀石綠 ································· 100%

隱性孔雀石綠 ································ 0.1%

結晶紫 ···································· 95%

隱性結晶紫 ·································· 0.1%

樣本回收率

水樣、水產(chǎn)品 ···························· 80%~110%

精密度

板內、板間變異系數(shù)≤12%

三、試劑盒組成

1	微量測試孔	每條8孔，一板12條
2	10倍濃縮標準液×6瓶（1ml/瓶、黑色帽）	0ppb	0.5ppb
		1.5ppb	4.5ppb
		13.5ppb	40.5ppb
3	酶標記物	12ml	紅色帽
4	抗體工作液	7ml	藍色帽
5	底物A液	7ml	白色帽
6	底物B液	7ml	黑色帽
7	終止液	7ml	黃色帽
8	20X濃縮洗滌液	40ml	白色帽
9	氧化劑	3ml	白色帽
10	4X濃縮復溶液	50ml	透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱

微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl

試劑：乙腈、二氯甲烷、無水硫酸鈉、正己烷

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。

樣本前處理需配制：

配液1 樣品提取液

乙腈-二氯甲烷混合溶液：

V_乙腈-V_二氯甲烷= 4 : 1， 取40ml乙腈，

再加入10ml二氯甲烷，混勻后使用。

配液2 樣品復溶液

將4X濃縮復溶液用去離子水按1：3稀釋

（1份4×濃縮復溶液+3份去離子水），或按所

需用量配制。

樣本處理：

水樣處理方法

取50µl清澈水樣樣直接測定（如果水樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min，直至得到清澈樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù): 1倍

水產(chǎn)品處理方法

稱取2±0.05g均質組織樣品于50ml離心管中，加入6ml樣品提取液（配液1），2g無水硫酸鈉，振蕩5min ，室溫（25℃左右）4000r/min以上離心10min；
取3ml上清液，加入20µl氧化劑，搖勻，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；
加入1ml正己烷，加入1ml樣品復溶液（配液2），振蕩搖勻1min，4000r/min以上離心5min；
取下層50 µl用于分析；

樣本稀釋倍數(shù): 1倍

注：此方法所得到的結果為孔雀石綠；隱性孔雀石綠；結晶紫；隱性結晶紫的總量。

六、 酶標免疫分析程序:

測定前應須知：

使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟：

從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
配液1：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

配液2：

配制孔雀石綠標準液：取一定量的10倍濃縮

標準液用樣品復溶液10倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用，

具體如下：

標準液6：配制4.05ppb標準液--取50ul 40.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；

標準液5：配制1.35ppb標準液--取50ul 13.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；

標準液4：配制0.45ppb標準液--取50ul 4.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；

標準液3：配制0.15ppb標準液--取50ul 1.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；

標準液2：配制0.05ppb標準液--取50ul 0.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；

標準液1：配制 0ppb標準液--取50ul 0ppb標

準液加450ul樣品復溶液混勻；

編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加入抗體工作液50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應30min。
將孔內液體甩干，用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
每孔加入酶標記物100µl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應30min。將孔內液體甩干，用洗滌液充分洗，4～5遍（同上），用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內讀數(shù)），測定每孔OD值。